Os fungos que causam podridão do colo e radicular prejudicam grandemente a cultura do melão. A Macrophomina phaseolina sendo patógeno habitante do solo está entre as que mais causam perda total da produção. As buscas por um controle alternativo e mais eficaz vem sendo estudada dia a dia para futuramente um possível controle biológico. Assim, o presente trabalho teve o objetivo de avaliar o potencial de inoculação eficaz para a podridão do colo no meloeiro com a capacidade de expressão da doença em condições controladas. Foram realizados três ensaios, sendo primeiro a avaliação de produção de inóculo em arroz, o segundo inoculação em substrato orgânico, e o terceiro em casca de arroz carbonizada misturada com substrato. O potencial de inóculo tanto em arroz quanto em substrato foi eficiente em promover podridão do colo, sendo a infestação por substrato a que teve maior nota de avaliação, o que pode indicar um possível método a ser aplicado em estudos que envolvam a reprodução da doença em ambiente controlado.