O aumento da demanda por alimentos, aliado a necessidade de uma produção agrícola que utiliza menos fertilizantes químicos e pesticidas sintéticos tem impulsionado o desenvolvimento de novas ferramentas para a agricultura. Neste cenário, os microrganismos têm sido vistos com uma possível ferramenta que alia redução de custos e produtividade. Devido ao crescimento na produção e uso de bioinsumos, e as projeções para um crescimento contínuo, as técnicas de produção estão sendo atualizadas constantemente, e o meio de cultura é um fator importante e precisa ser considerado para obtenção de melhores resultados na multiplicação, seja industrial ou on farm. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a eficiência de um meio de cultura alternativo para o crescimento e multiplicação de microrganismos, de interesse agrícola, em condições laboratoriais. Bacillus amyloliquefaciens e Chromobacterium subtsugae foram cultivadas em meio de cultura TSB e meio de cultura alternativo em diferentes concentrações (0,2%, 0,5%, 1% e 2%) para estabelecimento da sua curva de crescimento a partir da determinação da densidade óptica (DO) a 600 nm a cada 12 horas, durante 72 horas. Na fermentação de B. amyloliquefaciens todas as concentrações do meio alternativo permitiram atingir o crescimento semelhante à do meio TSB, sendo que a melhor concentração foi de 1%. Para C. subtsugae sua taxa de crescimento foi melhor nas concentrações 1% e 2% quando comparado aos demais tratamentos, porém, a concentração de 1% se mostra mais viável economicamente. Este estudo mostrou que o meio de cultura alternativo é uma opção para a multiplicação das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, de interesse agrícolas testadas.