Avaliação da atividade antileishmania de derivados do ácido betulínico
| dc.contributor.advisor | Guimarães, Elisalva Teixeira | |
| dc.contributor.author | Magalhães, Tatiana Barbosa dos Santos | |
| dc.contributor.referee | Meira, Cassio Santana | |
| dc.contributor.referee | Macambira, Simone Garcia | |
| dc.date.accessioned | 2021-08-21T15:58:55Z | |
| dc.date.available | 2021-08-21T15:58:55Z | |
| dc.date.issued | 2021-03-11 | |
| dc.description.abstract | Introdução: As leishmanioses são doenças endêmicas causadas por diferentes espécies de parasitos intracelulares do gênero Leishmania. O tratamento utilizado para estas doenças é o mesmo há décadas e está associado a efeitos adversos graves, baixa eficácia, elevada toxicidade, dificuldade de administração, alto custo e crescente resistência. Diante disto, torna-se necessária a identificação de novos fármacos com ação leishmanicida mais efetivos do que as substâncias atualmente disponíveis. O ácido betulínico é um composto de origem natural presente em regiões de mata atlântica do nordeste brasileiro, com atividade anti-inflamatória e antiparasitária já relatadas na literatura. Objetivos: Este trabalho teve como objetivo investigar o potencial leishmanicida de derivados do ácido betulínico em ensaios in vitro frente a diferentes espécies de leishmania, bem como os seus possíveis mecanismos de ação. Materiais e métodos: Inicialmente, ensaios de citotoxicidade frente a células de mamíferos e a avaliação da viabilidade de formas promastigotas de diferentes espécies de leishmania foram realizados in vitro. A partir destes dados, foram determinados a CC50 e a CI50 dos compostos. Ensaios de apoptose e necrose, ciclo celular, potencial de membrana mitocondrial foram realizados por citometria de fluxo, além da microscopia eletrônica de varredura a fim de elucidar os possíveis mecanismos de ação. Por fim, foi realizado ensaio de terapia combinada a fim de avaliar sinergismo entre BA5 e anfotericina B. Resultados e discussão: Os derivados do BA foram mais potentes que o protótipo (BA: CC50=18,8 ± 0,1 μM; CI50>100 μM para as espécies de leishmania em estudo). O BA5 e BA8 apresentaram baixa citotoxicidade (CC50=31,1±1,2 μM ;53,5 ± 0,4 μM) e inibiram a proliferação de formas promastigotas de L. amazonensis (CI50=4,5±1,1 μM; 8,1± 0,8 μM), L. major (CI50= 3,0± 0,8 μM ;12,89 ± 0,5 μM), L. braziliensis (CI50= 0,9 ± 1,1 μM;1,3 ± 0,09 μM) e L. infantum (CI50 = 0,15 ± 0,05μM). Os compostos também reduziram a porcentagem de macrófagos infectados por L. amazonensis e o número de parasitos intracelulares/macrófago. O BA5 apresentou CI50= 4,1 ± 0,7μM e o BA8 exibiu CI50= 5,9 ± 0,4 μM. Formação de blebs na membrana, alterações no tamanho e danos flagelares foram observadas após análise ultraestrutural por MEV de promastigotas incubadas com BA5. Análises de citometria de fluxo demonstraram que o BA5 induz apoptose e parada no ciclo celular na fase G0/G1. Não houve alteração de potencial da membrana mitocondrial de L. amazonensis após o tratamento com o BA5. Surpreendentemente, a combinação de BA5 e anfotericina B revelou efeito sinérgico contra as formas promastigotas de L. amazonensis. Em conclusão, o composto BA5 é um agente antileishmania eficaz, seletivo e uma alternativa terapêutica promissora no tratamento das leishmanioses. | pt_BR |
| dc.description.abstract2 | Introduction: Leishmaniases are endemic group of diseases caused by species of intracellular parasites of the Leishmania genus. The treatment used for these conditions has been the same for decades and is associated with serious adverse effects, such as low efficacy, high toxicity, difficulty in administration, high cost and increased resistance. Thereby, it becomes necessary to identify new drugs with a more effective leishmanicidal action than the currently available substances. Betulinic acid is a naturally occurring compound present in Atlantic forest regions of northeastern Brazil, with anti-inflammatory and anti-parasitic activity already reported in the literature. Objectives: This study aimed to investigate the leishmanicidal potential of betulinic acid derivatives in vitro assays against different species of Leishmania, as well as its possible mechanisms of action. Materials and methods: Initially, cytotoxicity assay against mammalian cells and an evaluation of the viability of promastigote forms of different species of Leishmania were performed in vitro. From these data, compounds CC50 and CI50 were determined. Apoptosis and necrosis assays, cell cycle, mitochondrial membrane potential and scanning electron microscopy were conducted by flow cytometry aiming to elucidate the possible mechanisms of action. Results and discussion: BA derivatives were more potent than the prototype. BA5 and BA8 showed low cytotoxicity (CC50 = 31.1 ± 1.2 μM; 53.5 ± 0.4 μM) and inhibited the proliferation of promastigote forms of L. amazonensis (IC50 = 4.5 ± 1.1 μM; 8.1 ± 0.8 μM), L. major (CI50 = 3.0 ± 0.8 μM; 12.89 ± 0.5 μM), L. braziliensis (CI50 = 0.9 ± 1.1 μM ; 1.3 ± 0.09 μM) and L. infantum (IC50 = 0.15 ± 0.05μM). The compound also reduced the percentage of macrophages infected by L. amazonensis and the number of intracellular / macrophage parasites. BA5 showed IC50 = 4.1 ± 0.7 μM and BA8 showed IC50 = 5.9 ± 0.4 μM. In the ultrastructural analysis, it was observed that the promastigotes incubated with BA5 showed morphological changes, such as membrane blebbing, flagella damage, increased size, and body deformation. Flow cytometry analysis indicated that the death of the parasite is possibly induced by apoptosis, the cell cycle arrest in the G0 / G1 phase and did not induce alterations in membrane potential in L. amazonensis promastigotes. Surprisingly, the combination of BA5 and amphotericin B revealed synergistic effects in the promastigote forms of L. amazonensis. In conclusion, the compound BA5 is an effective, selective antileishmania agent and a promising therapeutic alternative in the treatment of leishmaniases. | |
| dc.identifier.citation | MAGALHÃES, Tatiana Barbosa dos Santos. Avaliação da atividade antileishmania de derivados do ácido betulínico. 2021. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) – Departamento de Ciências da Vida, Universidade do Estado da Bahia, Salvador, 2021. | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/20.500.11896/1887 | |
| dc.identifier2.Lattes | http://lattes.cnpq.br/9009579411952610 | |
| dc.identifier2.ORCID | https://orcid.org/0000-0002-5237-0260 | |
| dc.language.iso | por | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | en |
| dc.subject.keywords | Leishmaniose | pt_BR |
| dc.subject.keywords | Ácido betulínico | pt_BR |
| dc.subject.keywords | L. amazonensis | pt_BR |
| dc.subject.keywords | Citotoxicidade | pt_BR |
| dc.title | Avaliação da atividade antileishmania de derivados do ácido betulínico | pt_BR |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/masterThesis | pt_BR |