Avaliação da atividade e do mecanismo de ação da chalcona E-1- BENZO[D][1,3] DIOXOL-5-IL) -3-(3-BROMO-4-ETOXI-5-METOXIFENIL) PROP-2-EN-1-ONA contra Leishmania braziliensis

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dc.contributor.advisorGuimarães, Elisalva Teixeira
dc.contributor.authorSantos, Francisnaira da Silva
dc.contributor.refereeRibeiro, Erika Maria
dc.contributor.refereeVasconcelos, Juliana Fraga
dc.date.accessioned2024-03-05T20:04:01Z
dc.date.available2024-03-05T20:04:01Z
dc.date.issued2023-12-15
dc.description.abstractIntrodução: A leishmaniose faz parte de um complexo de doenças tropicais negligenciadas. O tratamento utilizado para estas doenças é o mesmo há décadas e está associado a efeitos adversos graves, elevada toxicidade, administração dolorosa, alto custo e crescente resistência medicamentosa. Neste contexto, torna-se necessária a identificação de novas alternativas terapêuticas com ação leishmanicida. Objetivos: Este trabalho teve como objetivo a investigação da atividade e do mecanismo de ação da chalcona E-1- benzo [d][1,3] dioxol-5-il)-3-(3-bromo-4-etoxi-5-metoxifenil) prop-2-en-1-ona (FERAI) contra Leishmania braziliensis. Materiais e Métodos: A avaliação da citotoxicidade em macrófagos murinos da linhagem J774 e da viabilidade frente às formas promastigotas e amastigotas de L. braziliensis após o tratamento com FERAI foi mensurada utilizando o teste do Alamar Blue®. O número de macrófagos infectados e o número de amastigotas/100 células foi determinado por contagem direta em microscópio óptico. A análise do padrão de morte celular e a influência do FERAI sobre o potencial da membrana mitocondrial, na produção de espécies reativas de oxigênio e na indução de morte celular em promastigotas foi avaliada por citometria de fluxo. As alterações ultraestruturais em promastigotas de L. braziliensis foram avaliadas por microscopia eletrônica de transmissão e microscopia eletrônica de varredura. Por fim, o ensaio de terapia combinada foi realizado com o intuito de avaliar a interação farmacológica entre o FERAI e anfotericina B. Resultados e Discussão: O FERAI foi cerca de dezoito vezes menos citotóxico que a anfotericina B (FERAI: CC50 = 66 ± 0,12 μM; anfotericina B: CC50 = 3,6 ± 0,50 μM). Além disso, a chalcona inibiu a proliferação de promastigotas e de amastigotas de L. braziliensis (IC50 = 9,75 ± 1,7 μM; 10,13 ± 0, 05 µM, respectivamente), sendo cerca seis vezes mais seletivo para os parasitos do que para células. O FERAI reduziu de forma significativa a concentração de macrófagos infectados por L. braziliensis e o número de parasitos intracelulares/macrófagos quando comparado com o controle negativo. O FERAI induziu a morte celular de promastigotas por apoptose. Além disso, o FERAI provocou alterações no potencial da membrana mitocondrial e aumentou a produção de espécies reativas de oxigênio em promastigotas de L. braziliensis. Alterações à nível celular também foram observadas após o tratamento com FERAI como a retração do corpo celular, formação de vacúolos lipídicos, afrouxamento e lise de membrana. A combinação do FERAI e anfotericina B revelou efeito sinérgico contra as formas promastigotas de L. braziliensis. Conclusões: Esse trabalho demonstra a atividade antileishmania inédita e promissora do FERAI, em ensaios in vitro.
dc.description.abstract2Introduction: Leishmaniasis is part of a complex of neglected tropical diseases. The treatment used for these diseases has been the same for decades and is associated with serious adverse effects, high toxicity, painful administration, high cost and increasing drug resistance. In this context, it is necessary to identify new therapeutic alternatives with leishmanicidal action. Objective: This study investigated the activity and mechanism of action of the chalcone E-1- benzo [d][1,3]dioxol-5-yl)-3-(3-bromo-4-ethoxy-5-methoxyphenyl) prop-2-en-1-one (FERAI) against Leishmania braziliensis. Materials and Methods: The evaluation of cytotoxicity in murine macrophages of the J774 strain and viability against promastigotes and amastigotes forms of L. braziliensis after treatment with FERAI was measured using the Alamar Blue® test. The number of infected macrophages and the number of amastigotes/100 cells were determined by direct counting under an optical microscope. The analysis of the cell death pattern, the influence of FERAI on mitochondrial membrane potential, production of reactive oxygen species and induction of cell death in promastigotes was evaluated by flow cytometry. Ultrastructural changes in L. braziliensis promastigotes were evaluated by transmission electron microscopy and scanning electron microscopy. Finally, the combined therapy test was carried out with the aim of evaluating the pharmacological interaction between FERAI and amphotericin B. Results and Discussion: FERAI was about eighteen times less cytotoxic than amphotericin B (FERAI: CC50 = 66 ± 0.12 μM; ANFO B: CC50 = 3.6 ± 0.50 μM). Furthermore, this chalcone inhibited the proliferation of L. braziliensis promastigotes and amastigotes (IC50 = 9.75 ± 1.7 μM; 10.13 ± 0.05 μM, respectively), being approximately six times more selective for parasites than for cells. FERAI reduced the percentage of macrophages infected by L. braziliensis and the number of intracellular parasites/macrophages in a concentration dependent manner, when compared to the negative control. FERAI induced cell death of promastigotes by apoptosis. In addition, FERAI caused changes in mitochondrial membrane potential and increased the production of reactive oxygen species in L. braziliensis promastigotes. Changes at the cellular level were also observed after treatment, such as cell body retraction, formation of lipid vacuoles, membrane loosening and lysis. The combination of FERAI and amphotericin B revealed a synergistic effect against of L. braziliensis promastigotes. Conclusions: This study demonstrates the unprecedented and promising antileishmanial activity of FERAI, in in vitro assays. Keywords: Chalcone; Leishmania braziliensis; Mechanism of action.
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dc.identifier.citationSANTOS, Francisnaira Silva. Avaliação da atividade e do mecanismo de ação da chalcona E-1- BENZO[D][1,3] DIOXOL-5-IL)-3-(3-BROMO-4-ETOXI-5-METOXIFENIL) PROP-2-EN-1-ONA contra Leishmania braziliensis. Orientadora: Elisalva Teixeira Guimarães. 112f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas). Universidade do Estado da Bahia. Departamento de Ciências da Vida. Campus I, Salvador,2023.
dc.identifier.urihttps://saberaberto.uneb.br/handle/20.500.11896/5147
dc.identifier2.Latteshttps://lattes.cnpq.br/2323899358465218
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade do Estado da Bahia
dc.publisher.programPrograma de Pós Graduação em Ciências Farmacêuticas
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by/3.0/br/
dc.rights2Attribution 3.0 Brazilen
dc.subject.keywordsChalcona
dc.subject.keywordsLeishmania braziliensis
dc.subject.keywordsMecanismo de ação
dc.titleAvaliação da atividade e do mecanismo de ação da chalcona E-1- BENZO[D][1,3] DIOXOL-5-IL) -3-(3-BROMO-4-ETOXI-5-METOXIFENIL) PROP-2-EN-1-ONA contra Leishmania braziliensis
dc.title.alternativeEvaluation of the activity and mechanism of action of chalcone E-1-BENZO[D][1,3] DIOXOL-5-IL)-3-(3-BROMO-4-ETOXY-5-METHOXYPHENYL)PROP-2-EN-1-ONA against Leishmania braziliensis
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
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