Avaliação do potencial citotóxico de complexos inéditos de Ru (II) contendo tiomidas em diferentes linhagens de células cancerígenas

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dc.contributor.advisorMeira, Cássio Santana
dc.contributor.authorPacheco, Luciano Vasconcellos
dc.contributor.refereeSilva, Carlos Daniel Silva da
dc.contributor.refereeSantos Júnior, Aníbal de Freitas
dc.contributor.refereeRibeiro Filho, Jaime
dc.date.accessioned2022-12-05T12:57:12Z
dc.date.available2022-12-05T12:57:12Z
dc.date.issued2022-09-30
dc.description.abstractcâncer é definido como uma doença multifatorial sendo iniciada por mutações genéticas que causam um descontrole em vários aspectos celulares, incluindo a proliferação. As leucemias constituem um grupo de tumores malignos caracterizadas pelo acúmulo de leucócitos disfuncionais no tecido sanguíneo e na medula óssea. A quimioterapia apresenta papel fundamental no tratamento dos cânceres, entretanto apresenta limitações associadas à toxicidade e casos emergentes de resistência ao tratamento. Dessa forma, faz-se necessário o desenvolvimento de novos fármacos, e nesse contexto a utilização de complexos de rutênio (Ru) tem demonstrado resultados promissores. Objetivos: O trabalho visa avaliar o potencial citotóxico de complexos de rutênio Ru(II) contendo tioamidas inéditos. Materiais e Métodos: A citotoxicidade dos quatro complexos de rutênio contendo tioamidas foram testados contra 10 linhagens de células cancerígenas de diferentes tipos histológicos e uma linhagem não cancerígena através do ensaio do Alamar Blue. O ensaio para avaliação do sinergismo foi realizado dispondo da associação do FOR0212A com a doxorrubicina em diferentes proporções (1:1, 2:1 e 1:2) sendo mensurado pelo ensaio de Alamar Blue. Posteriormente, células HL-60 foram incubadas por 24 e 48 horas com diferentes concentrações do FOR0212A e o número de células viáveis foi determinado pelo ensaio de exclusão com o azul de tripam. Para o ensaio de hemólise, os complexos FOR0212A, FOR0012A, FOR020 e FOR000 (12,5; 25 e 50 µM), foram incubados com suspensão de eritrócitos por 1 hora. A solução de saponina a 1% foi utilizada como controle positivo, e o PBS 1x contendo 0,5% (v/v) de DMSO foi utilizado como controle negativo. O ensaio foi quantificado por espectrofotometria (540nm). Para quantificar os níveis de espécies reativas de oxigênio (ERO), as células foram tratadas com o FOR0212A dispondo do reagente diacetato de 2,7-diclorodihidrofluoresceína (H2-DCF-DA) e adquiridas em citometro de fluxo. Resultados: Quando avaliada a citotoxicidade, observou-se que o FOR0212A e o FOR0012A apresentaram atividade citotóxica para todas as linhagens cancerígenas testadas. A linhagem HL-60 foi a mais sensível para os dois complexos metálicos, sendo obtidos CI50 de 1,5 µM (± 0,3) e 5,7 µM (± 0,9), respectivamente. Foi demonstrado índice de seletividade relevante da FOR0212A (6,6) quando avaliada a razão de citotoxicidade entre as células normais (MRC-5) e a célula cancerígena (HL-60). Observou-se sinergismo entre a FOR0212A e a doxorrubicina, frente modelo celular com HL-60, apresentando índice combinatório de 0,27 (± 0,09). Associado a isso, o isobolograma evidenciou pontos abaixo da linha isobolográfica, o que sugere a ocorrência de efeito sinérgico. Ademais, os complexos FOR0212A e FOR0012A, ambas na concentração de 50 µM, evidenciaram atividade hemolítica de 21% (± 1,0) e 1%(± 0,8), respectivamente. Enquanto isso, a doxorrubicina, na concentração de 20 µM apresentou 13% (± 0,8) de hemólise. Por fim, foi observada elevação da produção de ERO´s, induzida pelo tratamento por 1 hora, com o FOR0212A na concentração de 3 µM (p<0,05). Conclusão: O presente estudo permitiu observar efeito citotóxico com boa seletividade para o FOR0212A e para o FOR0012A Ademais, visualizou-se efeito sinérgico do complexo FOR0212A com a doxorrubicina, fármaco já utilizado no tratamento da LPA, baixa atividade hemolítica nas concentrações citotóxicas e aumento da produção de ERO como um dos prováveis mecanismos de morte celular.pt_BR
dc.description.abstract2Cancer is defined as a multifactorial disease being initiated by genetic mutations that cause a lack of control in several cellular aspects, including proliferation. Leukemias are a group of malignant tumors characterized by the accumulation of dysfunctional leukocytes in blood tissue and bone marrow. Chemotherapy plays a fundamental role in the treatment of cancers, however it has limitations associated with toxicity and emerging cases of resistance to treatment. Thus, it is necessary to develop new drugs, and in this context the use of ruthenium (Ru) complexes has shown promising results. Objectives: The work aims to evaluate the cytotoxic potential of ruthenium Ru(II) complexes containing new thioamides. Materials and Methods: The cytotoxicity of four ruthenium complexes containing thioamides were tested against 10 cancer cell lines of different histological types and one non-cancerous cell line using the Alamar Blue assay. The assay to assess synergism was performed using the association of FOR0212A with doxorubicin in different proportions (1:1, 2:1 and 1:2) being measured by the Alamar Blue assay. Subsequently, HL-60 cells were incubated for 24 and 48 hours with different concentrations of FOR0212A and the number of viable cells was determined by the trypan blue exclusion assay. For the hemolysis assay, the FOR0212A, FOR0012A, FOR020 and FOR000 complexes (12.5; 25 and 50 µM) were incubated with erythrocyte suspension for 1 hour. 1% saponin solution was used as a positive control, and 1x PBS containing 0.5% (v/v) DMSO was used as a negative control. The assay was quantified by spectrophotometry (540nm). To quantify the levels of reactive oxygen species (ROS), the cells were treated with FOR0212A using the reagent 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2-DCF-DA) and acquired in a flow cytometer. Results: When cytotoxicity was evaluated, it was observed that FOR0212A and FOR0012A showed cytotoxic activity for all cancer cell lines tested. The HL-60 strain was the most sensitive for the two metal complexes, with IC50 of 1.5 µM (± 0.3) and 5.7 µM (± 0.9), respectively. A relevant selectivity index of FOR0212A (6.6) was demonstrated when the cytotoxicity ratio between normal cells (MRC-5) and cancer cells (HL-60) was evaluated. Synergism was observed between FOR0212A and doxorubicin, in front of a cell model with HL-60, with a combinatorial index of 0.27 (± 0.09). Associated with this, the isobologram showed points below the isobolographic line, which suggests the occurrence of a synergistic effect. Furthermore, the FOR0212A and FOR0012A complexes, both at a concentration of 50 µM, showed hemolytic activity of 21% (± 1.0) and 1% (± 0.8), respectively. Meanwhile, doxorubicin, at a concentration of 20 µM, showed 13% (± 0.8) of hemolysis. Finally, an increase in ROS production was observed, induced by treatment for 1 hour, with FOR0212A at a concentration of 3 µM (p<0.05). Conclusion: The present study allowed us to observe a cytotoxic effect with good selectivity for FOR0212A and FOR0012A In addition, a synergistic effect of the FOR0212A complex with doxorubicin, a drug already used in the treatment of APL, low hemolytic activity at cytotoxic concentrations and increased ROS production as one of the probable mechanisms of cell death.
dc.identifier.citationPACHECO, Luciano Vasconcellos. Avaliação do potencial citotóxico de complexos inéditos de Ru (II) contendo tiomidas em diferentes linhagens de células cancerígenas.2022. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Departamento de Ciências da Vida – Campus I, Universidade do Estado da Bahia, Salvador, 2022.
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11896/3790
dc.identifier2.Latteshttp://lattes.cnpq.br/5538900540993769
dc.identifier2.ORCIDhttps://orcid.org/0000-0002-6210-3828
dc.language.isopor
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccessen
dc.subject.keywordsCâncerpt_BR
dc.subject.keywordsRutêniopt_BR
dc.subject.keywordsSinergismopt_BR
dc.subject.keywordsCitotoxicidadept_BR
dc.titleAvaliação do potencial citotóxico de complexos inéditos de Ru (II) contendo tiomidas em diferentes linhagens de células cancerígenaspt_BR
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesispt_BR
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